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3.7 荧光素酶检测技术(Luciferase )实验流程

摘要 : 荧光素酶检测技术(Luciferase )实验流程
为取得最佳测定效果,在用单管的荧光测定仪测定时,样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内,例如30秒内。 由于温度对反应有影响,所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。 为保证荧光素酶检测试剂的稳定性,可以采取适当分装后避光保存的方法,以避免反复冻融和长时间暴露于室温。一般来说,如果不分装使用三次(期间冻融三次),对测定结果无明显影响。 样品和测定试剂混合后,必须等待1-2秒,再进行测定。测定时间通常为10秒,根据情况也可以测定更长或更短时间,但是同一批样品最好使用相同的测定时间。 为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差,可以同时转入Renilla荧光素酶的报告基因质粒作为内参,采用双荧光素酶报告基因检测试剂盒进行检测;也可以同时转入β-半乳糖甘酶报告基因质粒作为内参,然后采用β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒进行检测。采用荧光素酶报告基因检测试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品,可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒中的测定。 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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