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转膜

标签:探针转膜Northern 杂交Northern免疫杂交Northern B
Northern 杂交是RNA定量测定的一种检测方法,主要利用碱基配对原则,利用特性的DNA探针与其杂交,经过显影技术分析RNA的量和大小。是RNA定量测定的一种检测方法,主要利用碱基配对原则,利用特性的DNA探针与其杂交,经过显影技术分析RNA的量和大小。
标签:Western Blot转膜封闭
转膜后,膜上其他的空白位置需要用封闭液封闭。Western的灵敏度某种程度上受限于封闭做的好不好。脱脂奶是最常用的经济配方(实验太晚了还可以补充一下营养,哈哈),用这种封闭剂由于里面可能有痕量的生物素和碱性磷酸酶,可能造成背景污染而不适合生物素—亲和素的检测方法(如果用了生物素标记的Marker而且结果背景较高,分析结果也有可能是受此影响),脱脂奶也不适合
标签:转膜染胶染膜WesternBlot
在电流的作用下,使蛋白质从胶转移至固相载体(膜)上。膜的选择:印迹中常用的固相材料有NC膜、DBM、DDT、尼龙膜、PVDF等。我们选用PVDF(聚偏二氟乙烯),其具有更好的蛋白吸附、物理强度,以及具有更好的化学兼容性。 有两种规格:Immobilon-P(0.45um)和Immobilon-PSQ(0.2um for MW<20kDa)。
标签:SDS-PAGE杂交膜转膜样品制备
杂交膜的选择是决定 Western blot成败的重要环节。应根据杂交方案、被转 移蛋白的特性以及分子大小等因素,选择合适材质、孔径和规格的杂交膜。用于Western blot的膜主要有两种:硝酸纤维素膜(NC) 和 PVDF 膜。NC 膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物,在低离子转移缓冲液的环境下,大多数带负电荷的蛋白质会与膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起, 但在非离子型的去污剂作用
标签:转膜Southernblot预杂交
用于检测重组DNA,也可分析DNA样品中是否有与探针序列同源的DNA片段。用于基因诊断,也可验证检测片段的分子量大小。将基因组DNA经限制性内切酶酶切,进行琼脂糖电泳,把分离后定位在凝胶上的不同分子量的DNA经碱变性处理,将凝胶中变性的DNA转移至一固相支持滤膜。利用标记的某一DNA、RNA或寡核苷酸与固着于滤膜上的DNA发生同源性杂交,利用放射自显影(化学发光法或显色
标签:BSA转膜
个人经验,仅供参考: 1.用脱脂奶粉封闭的效果不一定比用BSA差,不过我们试过几种奶粉,有一些奶粉不太适合.推荐使用的奶粉:雀巢高钙奶粉,多力精低脂奶粉.一般国产的奶粉的颗粒比较大,不太容易溶解. 2.关于三名治:本人以前做时花很多时间在防止短路上,现在我做的时候根本没有剪齐,最主要的是赶气泡,这是关键的关键,其实转膜的原理是电流的单向流动,现在的好多公司的转膜装置
标签:blotting转膜Western
下面的步骤适用于通过Xcell Ⅱ转印系统进行蛋白印记的大部分应用。为达到最佳效果,用户的优化是必要的。 I. 所需材料: Xcell SureLock或Xcell Ⅱ Mini-Cell以及Blot Module(Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051)电泳后的迷你胶(mini-gel)(最大的尺寸9cm*9cm)预先切割好的印记膜: 硝酸纤维素(Cat. no. LC2000或LC2001), PVDF(Cat. No. LC2002)或Nylon+(Cat. No. LC2
标签:RNA电泳甲醛转膜变性
从组织或细胞中提取出来的核酸(DNA/RNA)经琼脂糖凝胶电泳将其按分子量的大小分离,然后将其转移到固相支持物上(如:硝酸纤维素膜),用被标记的已知核酸片断(探针)对固相支持物上的待检测核酸进行检测(杂交)。 一、RNA电泳(甲醛变性电泳) 【目的】 将DNA/RNA通过凝胶电泳使之在凝胶中分离出来,通过加入标准核酸分子(markers)对其进行鉴定,并用于转膜、杂交等
标签:RNA电泳转膜基本
实验原理:基本同Southern Blotting,但因RNA是单链分子,必须消除局部区域形成的二级结构,在电场中泳动的距离才能反映它本身的大小,因而需使用变性胶进行电泳;操作过程中应特别注意防止RNA的降解。 实验材料:经检测质量好的RNA样品 实验步骤: 1.制胶: Agarose 1%-1.2%,1×MOPS buffer。 用灭菌的DEPC水定容,加热融化,冷却至70℃加甲醛,使终浓度为2%,通风橱中放1hr。 2.准备电
标签:DNA电泳琼脂转膜
转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定,是进行各种后续研究(如RFLP分析,阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。 实验目的:掌握Southern blotting的原理及操作步骤 实验原理: 1. 转膜的方式: 向上的毛细管转移 向下的毛细管转移 同时向两张膜转移 电转移 真空转移 2. 固相支持物的种类及选择: 硝酸纤维素膜:非共价结合,易
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