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光敏生物素核酸探针原位杂交组织化学程序

摘要 : 光敏生物素核酸探针原位杂交组织化学程序
光敏生物素核酸探针原位杂交组化程序 (1)石蜡切片脱蜡入水后,置0.1mol/l PBS pH7.2冲洗5min;冰冻切片直接入PBS冲洗5min。 (2)0.1mol/l 甘氨酸PBS冲洗5min。 (3)0.4%Trition X-100 PBS 冲洗15min。 (4)蛋白酶k1μg/ml(0.1mol/l Tris –HCl pH8.0, 50mmol/L EDTA配)37℃保温30min。 (5)4%多聚甲醛PBS固定5min。 (6)0.1mol/l PBS冲洗2×3min。 (7)0.25%乙酸酐(0.1mol/l 三乙醇胺配制)10min。 (8)2×SSC冲洗10min(1×SSC:0.15mol/l NaCl, 0.015mol/L 柠檬酸钠)。 (9)取10μl含相应探针的杂交液滴于标本上,如果是cDNA探针则用前将探针于95℃水浴中保温10min,马上放入冰浴中冷却,然后再用。 (10)盖上22×22mm的硅化盖片或合适大小的蜡膜,入温盒43℃保温12~16h。 (11)4×SSC洗脱盖片,并在同一液中37℃漂洗10~30min。 (12)2×SSC(含20μg/mlRNaseA, 适于RNA探针)冲洗30min,37℃。 (13)1×SSC,0.1×SSC,37℃各漂洗10~30min。 (14)0.05mol/l PBS 冲洗4×5min。 (15)3%BSA(0.4%Triton X-100 PBS配)37℃保温30min。 (16)Avidin –AKP(碱性磷酸酶)(1:500~1:100,0.4%Triton X-100 PBS配)室温1~3h。 (17)0.05mol/l PBS冲洗4×5min。 (18)TSM1冲洗2×5min。 (19)TSM2冲洗2×5min。 (20)硝基四氮唑蓝(NBT)0.4%mg/ml 和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸(BCIP)0.2mg/ml混合液显色,室温,暗处3h。 (21)20mmol/l EDTA,pH8.0终止显色。 (22)甘油明胶直接封片。 作者:Snail 点击:
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